Analiza w skali ogólnoustrojowej i CXCL4 jako biomarker w leczeniu stwardnienia rozsianego AD 7

W pięciu niezależnych eksperymentach wykazano, że CXCL4 zmniejsza ekspresję czynnika transkrypcyjnego FLI1 (P <0,001) i indukuje ekspresję endoteliny (ET-1) (P = 0,003), zarówno na poziomie RNA i białka, w ludzkim skórze komórki śródbłonka mikrokrążenia (panel B). Poziom ekspresji dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej (GAPDH) ustalono na 1. Przy stymulacji ligandami receptorów Toll-podobnych (TLR) (w tym kontrola R848, CpG i CpG), komórki dendrytyczne plazmacytoidów od pacjentów z twardziną układową wydzielaną więcej interferonu . (interferon typu I) niż kontrole (panel C). Ta reakcja została całkowicie odwrócona przez dodanie przeciwciała przeciw CXCL4 (panel D). Pożywką hodowlaną była RPMI-1640 z 10% surowicą płodową. Wszystkie wartości są wyrażone jako średnie; T bary reprezentują standardowe odchylenia. Badaliśmy CXCL4 in vitro, stosując osocze otrzymane od pacjentów z twardziną układową i dostępnym w handlu CXCL4. Zarówno CXCL4, jak i osocze indukowały wydzielanie endoteliny i regulację w dół czynnika transkrypcyjnego FLI1 w ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępkowej (HUVEC) i ludzkich śródbłonkowych komórkach śródbłonka skóry (HDMEC). Dodanie przeciwciała anty-CXCL4 osłabiło te odpowiedzi (Figura 3A i 3B). Ponadto CXCL4 hamował wpływ czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego na proliferację HDMEC (P <0,001), odkrycie, które spekulujemy, może leżeć u podstaw rozrzedzenia naczyń u pacjentów z twardziną układową (dane nie przedstawione).
Uważa się, że komórki miażdżycowe plazmacytoidów i ich aktywacja przez receptory Toll odgrywają rolę w twardzinie układowej. W przypadku stymulacji przez ligandy receptorów typu Toll, komórki dendrytyczne plazmacytoidów od pacjentów z twardziną układową wydzielały więcej interferonu typu I niż te z grupy kontrolnej, różnica ta została całkowicie odwrócona przez dodanie przeciwciała anty-CXCL4 lub heparynazy (Figura 3C i 3D ). Przeciwnie, przeciwciało anty-CXCL12 (SDF-1) nie miało tego efektu (dane nie pokazane).
CXCL4 i zmiany zapalne w skórze
Rycina 4. Rycina 4. Zmiany zapalne skóry naśladujące osoby w twardzinie układowej wywołane przez CXCL4 In Vivo u myszy. Panele A i B pokazują wyniki analiz histologicznych skóry od myszy C57BL / 6 typu dzikiego, które traktowano buforowaną fosforanem solanką (PBS) jako kontrolą (panel A) lub CXCL4 (panel B) przez 7 dni z użyciem zastosowanie modelu pompy podskórnej, pokazanego przy 4 × i powiększeniu 20 × (hematoksylina i eozyna, po lewej stronie, barwienie immunohistochemiczne CD45, po prawej). Próbka mysi traktowana CXCL4 wykazuje znaczną infiltrację komórek zapalnych w skórze właściwej i podskórnej w porównaniu z próbką kontrolną. Panel C pokazuje kwantyfikację pogrubiania warstw skóry po traktowaniu CXCL4 przez 7 dni za pomocą modelu pompy, w porównaniu z kontrolami PBS
[przypisy: półpasiec na głowie, trioleinian glicerolu, tasiemiec szczurzy ]